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假病毒冻干简介

时间:2022-08-23 点击次数:188

假病毒是指一种反转录病毒整合了另外一种病毒的囊膜糖蛋白,从而形成的具有外源性病毒囊膜,而基因组仍保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒。假病毒用带有一种病毒外膜蛋白基因的质粒与带有另一种病毒骨架基因的质粒共转染到包装细胞(如293T细胞)中,外膜蛋白基因在包装细胞表面表达出外膜蛋白,另一种病毒的基因在包装细胞中转录翻译组装成病毒颗粒,病毒颗粒出芽时会被细胞表面表达的外膜蛋白所包装,即形成假病毒。假病毒具有以下优势:

①具有单轮感染特性,生物安全性较高。

假病毒核酸分子上编码囊膜蛋白的基因被修饰掉,因此不具备自我复制能力,只能进行单一周期的侵染,不能再组装成病毒颗粒。

②在系统中可引入报告基因,便于检测和分析。

可引入的报告基因主要有分泌型胎盘磷酸酯酶(SEAP)、β一半乳糖苷酶(Lac Z)、β一葡萄糖苷酸酶(GUS)、萤火虫荧光素酶(LUC)和绿色荧光蛋白(GFP)等,便于进行定性和定量分析。

③制备过程相对简单快速,降低了病毒变异,减少了检测时间。

④宿主范围广泛、易被浓缩成高滴度、稳定性及转染效率高。

在研究致病性高,并目不易体外培养的病毒时,制备假病毒是一种行之有效的、安全的、可信的方法。假病毒通常被用于病毒与宿主细胞间相互关系检测、受体鉴定、中和抗体效价评价及基因治疗等方面研究。综上所述假病毒用来研究是非常方便快捷的,因此假病毒的保存是需要解决的问题之一。假病毒用于检测试剂的冷冻干燥和贮藏过程中,很多因素如化学成分、冻结速率、冻结和脱水应力、玻璃化转变温度、干燥固体中剩余水分、贮藏环境的温度和湿度等都会影响其中活性组分的稳定性甚至会导致失活。假病毒试剂,都需要添加合适的冷冻干燥保护剂和添加剂,也就是所谓的冻干赋形剂,配制成混合液后,才能进行有效的冷冻干燥和贮藏。因此,冻干的假病毒试剂检测方法的开发、冻干保护剂的开发、
筛选及有效组合,还有冻干工艺曲线的方法开发及优化都是客观存在且亟需解决的问题。假病毒全基因组质控品能从采样步骤开始质控检测全流程,并且是稳定的冻干珠形式。其他假病毒也都可以做成冻干粉、冻干珠的形式。假病毒冻干的方法和其他试剂样本冻干的原理都是差不多的,也要筛选相应的保护剂、冻干曲线。各种靶基因的假病毒都可以开发成冻干形式进行保存或者配合试剂盒进行使用、运输、贮存等。各种形式样品冻干技术开发,冻干配方开发、冻干曲线开发,冻干样品评价生产放大技术、各种微生物冻干、制剂冻干、药品冻干等。

 

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