PCR 分子冻干机的使用方法通常包括以下几个关键步骤:
一、样品准备
混合试剂:将 PCR 反应所需的各种组分(如 DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTPs、MgCl₂、缓冲液和引物等)按照预定的比例混合均匀。
分装样品:将混合好的试剂分装到合适的容器中,注意避免样品溢出或过少。对于高浓度多糖等样品,可能需要先进行稀释处理。
二、预冻处理
放置样品:将分装好的样品放入冻干机的冷冻室中。
预冻操作:根据样品特性和设备要求,选择合适的预冻温度和时间。一般来说,可以使用 -80°C 冰箱进行速冻 4 小时以上,或者使用液氮进行急冻,确保样品冻硬。
三、冻干程序设置
启动设备:打开冻干机的总电源开关,启动制冷机进行预冷。
设置参数:根据样品特性和实验需求,设置冻干机的冷阱温度、真空度、阶段时间等参数。例如,冷阱温度可以设置为 -60°C,真空度设置为 0.05-0.08 mbar,阶段时间根据样品量和干燥需求进行调整。
启动冻干:确认参数设置无误后,点击“启动”按钮开始冻干程序。
四、样品装载与冻干过程
样品装载:按照设备要求,将预冻好的样品逐一挂入冻干机中。注意避免一次性挂入过多样品,以免气压波动导致样品融化。
监控过程:在冻干过程中,密切关注设备的运行状态和参数变化。如果发现异常情况,及时停止冻干程序并检查原因。
五、冻干结束与样品处理
停止冻干:当冻干程序结束后,点击“停止键”停止冻干机运行。等待压力表回归常压后,关闭外挂阀并取下样品瓶。
密封保存:将冻干后的样品密封保存在干燥器中,避免受潮和污染。
设备清洁:冻干结束后,对冻干机进行清洁和维护。包括化霜后的水份排空、设备擦拭、内腔和隔板清理及消毒等。
六、注意事项
样品处理:在样品准备和预冻过程中,要确保样品充分混合均匀并冻硬,以免影响冻干效果。
参数设置:冻干机的参数设置需要根据样品特性和实验需求进行调整,确保冻干过程的顺利进行。
操作规范:在操作过程中要遵循设备的使用说明和操作规程,确保操作安全和实验结果的准确性。
设备维护:定期对冻干机进行清洁和维护,延长设备的使用寿命并确保实验结果的可靠性。