荧光PCR扩增试剂冻干方法及应用示例说明

随着临床医学及生物诊断试剂的发展，为了满足临床需要，需要发明一种使用方面，不需要低温保存及运输的荧光PCR扩增试剂。

荧光PCr反应体系中含有荧光探针等试剂需要低温保存及避免其化学性质发生变化，因此需要采用冻干的方法。说到荧光PCr扩增试剂的冻干，其实跟其他药品或诊断试剂原理上没什么区别。主要方法步骤包括。

1、配液。将荧光PCR扩增缓冲液，引物，探针，启动酶等及冻干保护剂，按照配方进行混合配液。我们都知道冻干的药物或诊断试剂，其中冻干保护剂包含赋型剂等的选择非常重要。常见的冻干保护剂包括糖、多元醇类、聚合物、表面活性剂类、氨基酸类、盐类等。而一种冻干试剂，通常是不是添加一种保护剂，而是多种保护剂连用。也就是我们这个试剂配方的摸索其实是相对来说zui耗时间，也是关键所在。如：荧光PCR扩增试剂的冻干添加甘油、海藻糖、牛血清蛋白，甲酰胺等。通常是多种一起用。

2、冻干。将上述冻干液体配制好，分装到PCR扩增管或者八连管中。然后放入冻干机，开始进行整个冻干过程。对于冻干诊断试剂由于一般量很少，一个管内通常有50uL或者30ul，量很小，冻干工艺优化好的话，一般几个小时就可以冻一批。如将分装好的试剂放入冻干机中，在-35度预冻三小时。预冻完成后，冻干机内温度不变，开始抽真空降到10pa处理两个小时。2个小时升华结束后，真空状态下将冻干机内部温度升至10度，真空处理两小时。真空状态下继续将冻干机内部温度升至30度，处理两小时。这样整个冻干就完成了，整个过程9个小时，冻干完毕，盖上扩征管或8连管盖。通过这样冻干的方法制备好的荧光PCR冻干粉，四季常温避光保存，性质稳定，运输方便，使用方便，使用时只需要添加溶解即可。

任何一种含荧光探针的PCR试剂或者其他试剂如果想通过冻干的方法获得稳定的粉或者冻干微球，其实都是可以做成的，主要的是冻干配方的研究，对于冻干机选择制药用，工艺全的即可。

   以上医疗诊断冻干机系列，就可以用于诊断试剂、PCR荧光试剂的冻干、各种生物试剂及体外试剂均可以。