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胶体金冻干制品的制备方法示例说明

时间:2020-06-11 点击次数:188

免疫胶体金作为标记物用于免疫电镜技术是一种新的免疫学方法。免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique) 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术,英文缩写为:GICT。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附能力,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、 毒素、糖蛋白、酶、激素、病毒或细菌抗原等非共价结合,形成免疫胶体 金缀合物,用于免疫检测。

免疫胶体金常用的稳定剂(保护剂)对免疫胶体金的稳定性非常重要,国内外常应用的各 种稳定剂:牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖(Dextran)、聚乙二醇20000(PEG)、 明胶(gelatin)。目前普遍使用聚乙二醇20000(PEG)作为稳定剂。

免疫胶体金定性检测因其快速、简便,在医院检验科已广泛应用,用于妊娠早期诊断的人绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金法诊断试剂制造及检定规程已由中国生物制品规程公布。免疫胶体金技术常用于定性检测微生物感染、检测血清抗体、检测血清C-反应蛋白C RP等。

免疫胶体金技术快速又简便,所以广受欢迎,但要测定结果非常准确, 则免疫胶体金必须有好的稳定性,这在免疫胶体金定量检测中尤为重要, 是发展金标法快速定量检测试剂的前提。

生物制品冻干形式可以采用常温运输和储存,保存期长,大大降低低温保存不当带来的失效变性等,而且冻干后试剂稳定性好。因此采用冻干法可以制备制备胶体金冻干品、化学发光冻干品、荧光PCR冻干品等。冻干法已经在诊断试剂行业正在崛起。

那么冻干胶体金制品和冻干PCR试剂或者其他冻干其实都是相似的原理,主要步骤如下:

1.制备抗体包被胶体金

2.制备胶体金溶液:胶体金溶液包含了稳定剂、保护剂、缓冲液等。胶体金溶液的配置是非常关键的,如果配置的保护剂选择不当或者溶度不合适,可能在冻干过程中会发生破乳现象,严重的破乳会造成肉眼可见的颗粒凝聚。轻度的破乳引起的微量颗粒凝聚, 在检测过程中因直径增大而通不过微孔纤维膜,滞留在膜上的红色凝聚颗 粒就误报为假阳性的结果。

3.制备胶体金冻干品:制备冻干品的冻干工艺曲线可以优化。在控制风险,获得优质冻干品的同时优化工艺曲线,可以节省冻干时间,降低成本。

   所有的冻干制品的开发工艺基本上是一致的主要包含冻干配方筛选也就是保护剂的筛选,其次是冻干曲线工艺优化。

 

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