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蛋白酶k冻干开发

时间:2022-07-26 点击次数:286

蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶,具有很高的比活性,是DNA提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围(4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)均有活性,用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离。在DNA提取中,主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白,使 DNA游离在溶液中,随后用不同方法进行抽提,除去杂质,收集DNA。EDTA等螯合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。蛋白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于-20°C蛋白酶K在核酸纯化、丝绸、医药、食品和酿造等领域都有着重要的应用。由于储存和运输需要低温,而且反复冻融对活性也有影响,因此有必要开发一种可以长期稳定保存蛋白酶K的方法。

冷冻干燥技术是把含有水分的物料预先进行降温,冻结成固体,在一定的真空条件下使冰升华,以水蒸气形式除去,通过二次干燥获得低含水量的固体干燥物。

冷冻干燥是在低温、真空状态下完成对制品的脱水干燥过程的,相对于其他干燥方式具有很多优点,目前在生物制品、药品的干燥方法中是主要选择。主要体现在以下几个方面:样品预冻前完成全体系的分装,保证剂量的精确性;低温和真空下干燥,保证物质本身的理化性质和生物特性;固态的冰晶升华成为水蒸气后形成的疏松多孔结构,冻干制品具有良好的速溶性、复水性;脱水*,重量轻,方便储存和运输,可以常温运输和储存。

但是由于冻干过程是一个复杂的相变过程,蛋白酶K作为一种蛋白质,在冷冻干燥过程中极易受到冻干过程的低温效应、冻结效应和脱水效应的影响,最终导致其酶活性的降低甚至失活。因此为了减少蛋白酶K酶活性在冻干过程中的损伤,筛选合适的冻干保护剂和合适的冻干工艺尤为重要。

蛋白酶K常用保护剂蔗糖、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷、肌醇、甘氨酸、L丝氨酸、α丙氨酸、PEG、BSA、EDTA、ca离子等。各种保护剂可以相互组合或者采用单一组分加合适的缓冲液等。不同的保护剂配方行成的固形物含量不一样,所以关键温度不同,采用的冻干工艺技术路线也不一样。冻干工艺可以采用一步升华干燥法,或者阶梯升温干燥法,具体的工艺需要根据溶液的实际情况进行摸索。我公司供应冻干机可以摸索冻干工艺,助力筛选冻干配方,够买冻干机提供技术解决方案和技术协助,助力项目开发。


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