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好的PCR分子冻干机是冻干成功的关键

时间:2022-09-07 点击次数:105
  PCR是一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR的基础上,加入荧光标记的探针或相应的荧光染料来实现其定量功能。其原理是随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断积累,荧光信号强度成比例增加;每次循环后采集荧光强度信号,通过荧光强度的变化监测产物量的变化,从而得到荧光扩增曲线。
  
  随着临床医学和生物诊断试剂的发展,为满足临床需要,需要开发一种不需要低温储存和运输的荧光PCR扩增试剂。由于荧光PCR反应体系中含有活性酶、荧光探针等试剂,需要低温保存,以免其化学性质发生变化,因此需要冷冻干燥。冻干荧光PCR试剂的主要方法步骤包括:
 
  

PCR分子冻干机
 

 

  1、液体准备。荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、酶和冻干保护剂按配方混合,冻干保护剂的选择非常重要。常见的冻干保护剂包括糖类、多元醇、聚合物、表面活性剂、氨基酸、盐类等。一种可冻干的保护剂通常含有一种以上的保护剂,但也可以组合使用多种保护剂。然而,冻干保护剂配方的探索是一个耗时的过程,也是冻干成功的关键。
  
  2、冷冻干燥。准备好上述可冻干反应试剂,分装成PCR八管或定制PCR管,然后放入PCR分子冻干机,开始整个冻干过程。冷冻干燥过程通常分为三个不同的阶段:预冷冻阶段、初级干燥阶段和次级干燥阶段。在预冻阶段,温度一般在-50~-40℃保持2-3H。预冻后,保持冻干机内温度不变,开始抽真空至5-10pa,保持10-20h。升华后,将冻干机内部温度升至-35~-25℃并在真空下保持1-2h,然后继续将冻干机内部温度升至-5~5℃并保持1-真空下2h。最后,在真空下继续将冻干机内部温度升至25-35℃,保持10-12h。冻干后可通入氮气,然后按下塞子即可完成整个冻干操作。冻干法制备的荧光PCR试剂可在室温避光保存。它性质稳定,易于运输和使用。使用时只需加入溶解液或稀释剂即可。
  
  PCR分子冻干机采用不锈钢板设计,保证箱体表面光洁度,从而保证无菌要求。所设计的板层强度高,可保证在长期使用过程中对压盖无渗漏、变形和影响。板层通过机械加工可以保证对平整度要求高,平整度好,冻干箱板层温度均匀性好。板层控制温度-55~70℃,控制温度范围宽,加热和冷却温度可控,效率高。冷阱的极限温度≤-85℃,可对-50以上的任何共晶点进行冻干,适用范围广,对低共晶点温度的分子试剂更安全。

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