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重组酶聚合酶扩增技术(RPA)冻干简介

更新时间:2025-03-31 点击次数:200

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)能够在 恒温条件下(37℃-42℃)实现对核酸的快速特异性扩增,且在20min内可将核酸扩增至可检 测水平,具有良好的可操作性,能够在非实验室条件下完成核酸检测,被称为是具有可替代PCR潜力的核酸检测技术,且可以和琼脂糖凝胶检测、荧光检测技术结合实现实时、快速甚至定量检测。常温等温,是指维持在某一特定的温度,温度为22-42℃,接近常温,温度保持恒定,因为这种反应对设备的要求比较低,更适合应用于POCT或者即时诊断

常规的RPA检测试剂需低温保存、运输,并且反复冻融会影响性能的稳定。因此,开发常温下稳定保存、便于运输的试RPA剂至关重要。将RPA检测试剂制备成为冻干试剂是解决上述问题的可行思路。然而,RPA与CRISPR检测试剂是一种成分复杂的组合物,特别是冻干的RPA试剂与冻干的CRISPR试剂再反应过程中会混合为一个体系,其成分进一步复杂化,包含DNA、RNA和酶、冻干成分等物质。因而,在开发具体的检测试剂过程中,如何改进冻干试剂的组成,特别是如何设置冻干保护剂的组成,进而保证检测试剂的稳定性,避免其性能降低,这是一个重要的问题。

RPA试剂包含缓冲液,重组酶、DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。在常温下实现反应。

   1. 缓冲液:缓冲液是RPA试剂中常见的成分之一,它有助于维持反应体系的pH值稳定,从而确保反应的准确性和可靠性。

2. 酶:酶是RPA试剂中的关键成分,包含重组酶,DNA聚合酶、逆转录酶等,它们负责催化特定的化学反应。

3. 引物:引物是用于PCR(聚合酶链式反应)等反应的特异性DNA片段,它们帮助扩增目标DNA序列。包括一对或者多对引物。

4. 荧光染料:用于实时PCR等需要荧光检测的技术中,帮助实时监测反应进程。

由于RPA试剂包含多重成分,成分复杂,如各种酶,相互耐受温度,环境都不一样,保存条件很苛刻,而冻干成为解决保存的方法之一。冻干法是采用低温升华的方法,这种情况下不改变物质的特性,降低到很低的含水量,锁住物质本身的活性,复溶后恢复活性,获得液体状态下或者物质本身的新鲜状态。而RPA试剂冻干不同于常规的PCR试剂,由于其成分复杂,因此冻干保护剂和冻干曲线需要摸索。我公司在开发过程中建立了各种试剂的冻干保护体系和冻干曲线,购买任意一款硅油循环冻干机,我公司都可以提供免费的冻干技术协助。欢迎资料RPA冻干试剂冻干设备,冻干微球成型仪,微球分装机。


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