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荧光定量PCR的冻干(一)

时间:2020-04-28 点击次数:334

荧光定量PCR和普通PCR相比由于具有很多优点,所以目前对荧光pcr的研究很火。荧光PCR的优点包括:1、可以高灵敏检测单个细胞。2、高特异性和精确性 ,将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合,应用荧光探针和光电传导,直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化,以获得定量结果,相当于在PCR反应过程中自道动完成了Northern杂交;3、操作版简便、速度快 。通过计算机和分析软件实现PCR扩增、产物检测和定量分析一体化;4、安全、无污染。 FQ-PCR在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析,杜绝了传统PCR开放检测对环境的污染和由此导致的假权阳性;5、结果观测重复性好。 一起在线实时观测,结果判断直观,避免人为因素干扰。

荧光定量PCR虽然具有很多优点,但是荧光定量PCR扩增反应试剂在保存、运输和使用过程中要求在低温条件下进行,否则诊断试剂容易失效,因此试剂盒的长期保存和长途运输将会受到很大的限制,容易因诊断试剂保存温度不当而使其敏感性下降甚至完全失效,最终导致疫病的检测不及时而造成疫病流行。目前,针对核酸扩增反应试剂缺少能在4℃或室温长期保存的方法。因而冻干法逐步应用在荧光定量PCR试剂上。

冷冻干燥是把试剂预先进行降温冻结成固体,然后在真空条件下升华,将95%以 上的水分蒸发掉,而保护剂作为固剂在升华时不会崩塌,保证了冻干制品的形态。整个过程 在低温中进行,试剂活性不会受到影响。冻干试剂有着常温稳定、摆脱冷链、即时活化、不相容试剂共存、无交叉污染等很多明显优势,随着产业的升级,越来越多厂家尝试开发冻干试剂。国内对于冻干技术研究的累积相对较少,从学术到人才,都使得冻干技术在实际应用中有较难逾越的壁垒。实际上绝大部分的试剂都可以做成冻干的,他的风险并不是试剂本身,而是错误的方法和巨大的时间成本。

荧光定量PCR是可以实现冻干的。已经有很多公司生产了冻干型PCR试剂,如犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(冻干型/PCR-荧光探针法)、All-Ready 荧光定量RT-PCR试剂(冻干)、水痘RT-带状疱疹病毒野生株探针法荧光定量PCR试剂盒等。而国内IVD企业广东华银医药科技有限公司推出全组份冻干的“xin型guan状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)。从目前来看基本上大部分诊断试剂都是可以通过冻干法获得冻干试剂盒的。我公司提供冻干机和冻干技术支持,全力支持荧光定量PCR试剂的冻干项目。

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