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荧光PCR冻干粉保护剂筛选

时间:2020-04-29 点击次数:296

荧光pcr冻干粉和普通的pcr相比具有很多优点,可以常温运输,常温储存,保存时间长,使用方便,性质稳定等。但是荧光PCR试剂并不是拿过来放进冻干机中就可以直接冻干了,冻干物质的共同特点是基本上90%以上的冻干物质都需要添加冻干保护剂包括赋形剂,否则容易不成型或者冻出来不理想。

那么荧光PCR试剂冻干常采用哪些冻干保护剂呢?首先我们先来看两个发明。以下出自发明专:

1、本发明提供一种冻干添加剂及荧光PCR反应 混合物干粉和制备方法,具体涉及生物技术领 域,冻干添加剂包括A组分和B组分,A组分由二硫苏糖醇、吐温20、海藻糖、明胶和BSA组成,B组分 由叔丁醇组成。将该A组分加入到荧光PCR反应混合物原液的其他组分中存储待用,冻干前再将B 组分加入获得荧光PCR反应混合物原液,最后冻 干得到荧光PCR反应混合物干粉。本发明制备的 荧光PCR反应混合物干粉保证扩增性能的同时, 缩短冻干时间,减少冻干成本,并使冻干后的成 品结实,不易碎,并且能长期保存。该发明出自《一种冻干添加剂及荧光PCR反应混合物干粉和制备方法》。

2、本发明公开一种荧光PCR试剂的冻干保护剂 以及冻干芯片的制备方法,涉及生物检测技术领 域。所述冻干保护剂为由以下组分制备得到的溶 液:海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油,以及焦磷酸二乙酯处理过的水。由该冻干保护剂制备得到的荧光PCR冻干制剂可长期常温保存,且复溶速度快。本发明还提供一种包括上述冻干保护剂的荧光PCR冻干芯片的制备方法,该方法简单快速,可在八小时内完成冻干步骤。该发明出自《荧光PCR试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法》。

通过以上两个发明可以看出荧光PCR试剂的冻干保护剂常用的包括:1、糖类和多元醇类。糖类有单糖、低聚糖、多糖。其中海藻糖和棉子糖属于低聚糖,一般冻干保护剂中的糖多用低聚糖或者单糖和其他保护剂连用。海藻糖和蔗糖是糖类中zui常用的。两个发明中均有使用海藻糖。常用的多元醇类包括:山梨醇、甘露醇和甘油(丙三醇)。其中甘露醇和甘油都是比较常用的。2、聚合物:聚合物具有能提高生物制品混合溶液的玻璃化转变温度,同时起着低温保护剂和脱水保护剂的作用。其中,典型的的聚合物类保护剂有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清(BSA)、右旋糖苷(dextran)、聚乙二醇(PEG)等。 3、表面活性剂既能在冻结和脱水过程中降低冰水界面张力所引起的冻结和脱水变性;又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用。 常用的包括吐温\Triton X-100\蔗糖脂肪酸脂、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚。4、氨基酸类的保护剂:如甘氨酸,谷氨酸等。这两个配方中没有添加。氨基酸离子具有酸、碱两性,因此能够在生物制品的低温保存和冷冻干燥过程中能抑制溶液的pH变化,从而达到保护活性组分的目的。

缓冲剂:调节PH,保持ph的稳定。常见的多为盐类如:磷酸、乙二胺四乙酸、氯化钠、氯化钙、磷酸盐、醋酸盐和柠檬酸盐等。6、叔丁醇:在冻干配方中加入适量的叔丁醇(Tertiary Butyl Alcohol)后,冻结时会形成针状结晶;冰晶升华后,留下了管状通道,使水蒸汽流动阻力大大减小,升华速率显著提高。

从以上分析可以看出基本上一个完整的冻干保护剂体系是由多种保护剂连用。其中有的起保护作用,有的起调节稳定作用,有的起加速作用,还有的起填充剂和赋形剂的作用。其实按照冻干保护剂的筛选原则,逐步筛选优化就能找到冻干保护剂的组合配方。由于不同的荧光PCR体系成分不一样,因此所采用的冻干保护剂量和种类不同,需要根据情况选择合适的糖、多元醇、活性剂及缓冲剂等。

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