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微生物菌种冻干工艺流程

时间:2021-07-08 点击次数:291

微生物的保存方法很多,根据不同的微生物菌(毒)株或不同的实验要求,可选用不同的保存方法其中常见的有斜面保存法,穿刺保存法、液体石蜡保藏法沙土管保存法、冷冻保存法、真空冷冻干燥保存法。其中真空冷冻干燥保存法方便复活、保存期长,运输和保存方便,活菌率高。

冷冻干燥是将菌体悬浮液冷冻到冰点以下,从而转变为固体结晶态,然后在低温低压(真空)下使固体升华而脱水的干燥方法。一般干燥处理过程会破坏微生物的细胞膜,引起细胞的大量死亡,因此需要添加保护剂,能够使菌液密度均一,减少活菌在冻干过程中的机械效应和溶质效应带来的死亡。因此,在冻干前加入的保护剂配方就成为了至关重要的决定性因素,它既会影响到储存期细胞的活性以及稳定性,也会影响到复水时细胞存活率

     冻干法是长期保存细菌、酵母、真菌、病毒和立克次氏体的标准方法(在冻干前一般要加冷冻保护剂,这样可使细胞免除在冷冻初期因形成冰晶而造成的损害。ATCC 常规用10%脱脂奶或12%蔗糖作为冷冻保护剂,而美国农业部(USDA)的农业研究服务机构的实验人员用牛或马血清作为微生物的冷冻保护剂(。在菌液中加入甘油和二甲亚砜(DMSO)也可防止冷冻中微生物的死亡,但实际操作中应根据不同微生物决定应用或不用保护剂
    真空冷冻干燥法保存菌种的步骤主要包括:

1、微生物培养,培养获得健壮的菌种扩培液体。培养时根据菌种选择不同的培养基。培养到对数期获得大量健壮的菌种,保证菌体浓度,一般达到109的浓度.

2、离心收集菌体。通过离心法从液体培养基中获得菌体。如果是固体培养基可以直接收集菌落,用保护剂溶解混匀。

3、将菌体、脱脂奶粉、海藻糖、蔗糖等保护剂在无菌水中混匀得到含有保护剂的菌体混悬液。

4、分装。将菌体混悬液在无菌环境中分装到无菌容器中,可以是安瓿瓶、西林瓶、EP、培养皿等。

5、预冻,预冻是非常关键的。预冻不好,菌体会死亡。要快速预冻,防止产生大冰晶造成细胞死亡。预冻要冻结实,保证预冻充分。

6、将预冻好的菌体,放入真空冷冻干燥设备中进行冻干。如果是设备带预冻功能,也可以直接在冻干机上进行预冻。真空冷冻干燥时间和冻干曲线的 设计要根据菌种的不同和菌体混悬液的浓度等进行设计。冻干好后真空密封保存。

   微生物冻干法采用的冻干设备可以有多种选择,从实验室冻干机到研发型冻干机都可以适用。如以下系列冻干机都可以用来冻干保存微生物。

型号

Pilot2-4L

Pilot2-4M

Pilot2-4H

冻干面积

0.2

0.2

0.2

冷阱温度(空载)

-55℃

-85℃

-85℃

真空度(空载)

<6Pa

≤1Pa

≤1Pa

板层尺寸(mm

375*270

 

 

板层温度(空载)

-40℃

-55℃

-55℃

板层制冷方式

硅油循环

硅油循环

硅油循环

箱阱结构

箱阱一体式

箱阱一体式

箱阱分离式

捕水能力

4L

4L

4L

冻干效率

3L/24H

3L/24H

3L/24H

板层间距

80mm

80mm

80mm

压塞

手动

手动

手动

压缩机功率

7/8HP

2*7/8HP

2*7/8HP

真空泵

2L/S

 

 

整机尺寸
(约)

W660*D850*H1440

W660*D850*H1440

W660*D960*H1440

 

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